DAF-2 DA (5,6-Diaminofluorescein diacetate) is a cell-permeable fluorescent probe used for detecting nitric oxide (NO), requiring use in a serum-free environment free from phenol red interference. It has an excitation wavelength of 491 nm and an emission wavelength of 513 nm, with a commonly used working concentration of 1–10 μm.

评估线粒体总一氧化氮水平步骤：
1.使用黑色 96 孔细胞培养板以 5 × 10 ^3的密度将 SH-SY5Y 细胞重复接种 cells/well 中。
2.Gelsemium 处理后，将细胞在室温下避光在轨道振荡器上与 DAF-2 DA （10 μM，15 分钟） 一起孵育。
3.使用 Cytation 3 细胞成像多功能微孔板检测仪用 HBSS （Sigma） 洗涤两次后，在 485 nm（激发）/538 nm（发射）处检测到绿色荧光产物的形成，荧光强度为总细胞一氧化氮水平。[2]