BCIP (BCIP p-toluidine salt) (BCIP p-toluidine salt) is an artificial chromogenic substrate. It is used for the sensitive colorimetric detection of alkaline phosphatase activity.

使用方法
1. 溶液配制：
储备液：配制 BCIP 储备液，常用浓度为 50 mg/mL。将 BCIP 溶解于适量的二甲基甲酰胺（DMF）或水中，避光储存于 -20°C，可保存数周。
工作液：在适当的底物缓冲液中稀释 BCIP 至所需浓度（一般为 0.15–0.5 mg/mL）。缓冲液常用 Tris-HCl（pH 9.5），并添加 MgCl₂（1–5 mM）以提高酶活性。
2. 印迹实验：进行蛋白、电泳后的膜转移或核酸转印后，阻断非特异性结合。加入碱性磷酸酶标记的抗体或探针，按实验方案孵育并清洗去除未结合部分。
加入 BCIP/NBT（Nitro Blue Tetrazolium，硝基蓝四唑盐）工作液，避光孵育，直到显色完成（通常 5–30 分钟）。用蒸馏水终止反应，晾干膜用于结果分析。
3. 组织化学染色：
将组织切片或细胞样本与 ALP 相关抗体或探针反应后，清洗干净。
加入 BCIP 工作液，孵育至显色完成，用 PBS 或水终止反应。
4. 显微镜下观察染色结果。