5-IAF is a fluorescein derivative of indoleacetamide, a fluorescent probe that can be used to label proteins and others containing free thiols (cysteine side chains). 5-IAF can label the catalytic (alpha) subunit of dog kidney Na,K-ATPase.

使用方法
1. 配制与储存
a. 溶解性：
5-IAF 通常以粉末形式提供，易溶于 DMSO、DMF 或 pH ≥ 8 的水溶液。推荐储备液浓度：10–50 mM（根据实验需要调整）。
使用前，将其溶解于无水溶剂中，分装成小体积，避免反复冻融。
b. 储存条件：
粉末：储存在干燥环境中，避光保存于 -20°C 或更低温度。
溶液：短期可在 4°C 保存，长期建议 -20°C 下避光存储。
2. 巯基标记
a. 蛋白质还原处理（如有需要）：为确保巯基处于还原状态，可使用 DTT 或 TCEP 预处理蛋白质样品。
使用无巯基的缓冲液（如 PBS 或 HEPES），pH 7–8 是最佳范围。
b. 标记反应：
将 5-IAF 的储备液稀释至适当工作浓度（通常为 0.1–1 mM）。添加至蛋白质溶液中（蛋白浓度通常为 1–10 mg/mL），轻轻混匀。
c. 室温下孵育 30 分钟至 2 小时，具体时间需根据实验优化。
d. 终止反应：通过添加过量的还原剂（如 β-巯基乙醇）或稀释的方法终止标记反应。
e. 纯化：使用透析、凝胶过滤或离心超滤去除未结合的 5-IAF 和反应副产物。
3. 荧光检测
激发波长： ~495 nm。发射波长： ~520 nm（绿色荧光）。
可在荧光显微镜或荧光光谱仪中检测标记蛋白的荧光信号。