1. 小鼠细胞

2. 人源细胞

• 效率高：无需抗原递呈细胞或抗原，即可快速激活和扩增T细胞，简化实验流程。
• 活性好：磁珠无细胞毒性，确保T细胞的高活力和功能性。
• 易操作：无需使用分离柱，通过磁力架即可实现目标细胞分离。

• 适用于人外周血单核细胞（PBMC）或T细胞亚群：包括CD3+ T细胞、CD4+ T细胞或CD8+ T细胞。
• 活化后的T细胞可用于多种实验，例如转染/转导、研究TCR信号通路、蛋白质组学分析或基因表达研究等。此外，活化后的T细胞可继续在培养基中培养，用于分化为辅助性T细胞亚群，或扩增多克隆或抗原特异性的T细胞群体。

• 清洗缓冲液：使用含有2 mM EDTA和2%胎牛血清（FBS）的PBS，或含有2 mM EDTA和0.5% BSA的PBS。需在使用前通过0.22 μm滤膜进行无菌过滤处理。
• 细胞培养基：采用RPMI 1640培养基，添加2 mM谷氨酰胺和10% FBS（可根据需要加入100 U/mL青霉素-链霉素双抗）。扩增T细胞时，可在培养基中额外加入30 U/mL重组人IL-2（如TMPJ-01463）。此外，也可选择商品化T细胞培养基，其配方中的生长因子可以根据实验需求进行灵活调整。

以分选后人CD3+ T细胞为例：
一、磁珠清洗

1. 通过涡旋混匀（>30 s）或在旋转仪上放置5 min，使试管内的磁珠完全悬浮。
2. 将所需体积的磁珠转移至流式管中，加入等体积清洗缓冲液。如果磁珠体积不足1 mL，补加至1 mL的清洗缓冲液。轻轻涡旋5 s或用移液器反复吹打混匀，注意避免产生气泡（也可直接使用细胞培养基代替清洗缓冲液）。
3. 将流式管放置在磁力架上静置3 min，待磁珠聚集后弃去上清液。
4. 按步骤2和3再次清洗磁珠，此次使用细胞培养基作为清洗液。总计清洗磁珠两次。
5. 用细胞培养基重悬清洗后的磁珠。例如：若使用25 μL磁珠清洗，最后用1 mL细胞培养基重悬磁珠。

二、人T细胞激活（以96孔板为例）

1. 将T细胞浓度调整至1×10^7 cells/mL，每孔加入25 μL细胞悬液（每孔含2.5×10^5个T细胞），补充培养基使体积达到100 μL。
2. 向每孔加入100 μL清洗后重悬的磁珠，使磁珠与细胞的比例为1:1（可根据实验需求调整，推荐比例为1:1）。
3. 将96孔板放入37℃、5% CO₂培养箱中孵育，培养时长根据实验需求决定。
4. 收集激活后的T细胞，用于后续实验分析。
   注：在进行流式检测之前，使用磁力架去除磁珠（包括与细胞结合的磁珠，可通过轻柔吹打使磁珠释放）。此时，细胞悬浮在上清液中。收集上清液后，继续进行后续的流式检测步骤。

三、人T细胞扩增

1. 调整CD3+ T细胞浓度至1-1.5×10^6 cells/mL，按磁珠与细胞比例1:1添加激活磁珠。
2. 激活培养2天后，向培养基中加入30 U/mL重组人IL-2。
3. 将细胞与磁珠置于37℃、5% CO₂培养箱中孵育，具体培养时间视实验需要决定。
4. 每日观察细胞状态，包括激活与扩增情况，注意细胞形态和大小。当细胞出现皱缩或增殖速度减缓时，可能提示细胞耗竭。
5. 建议激活初期（前2天）不要处理细胞。2天后定期观察，当培养基变黄或细胞数量过多时，进行换液或传代。每次换液或传代时，需补充30 U/mL重组人IL-2。
6. 定期计数细胞密度。当细胞密度超过2.5×10^6 cells/mL时，轻柔吹打混匀，调整细胞浓度至0.5-1×10^6 cells/mL。

4℃，2年。

1. 避免冷冻磁珠。磁珠应保存在储存溶液中，防止干燥。
2. 在从磁珠保存管中取出磁珠之前，应充分震荡以确保均匀悬浮。操作过程中注意避免产生气泡。
3. 建议使用质量较好的移液器吸头和反应管，以避免因磁珠和溶液附着而造成损失。
4. 推荐使用磁场强度大于7000Gs的磁力架，磁性过低可能影响分选效果
5. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• C0150-人 CD3CD28 T 细胞激活磁珠说明书-中文(1.03 MB)