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Human CD3/CD28 T Cell Activation Beads

Human CD3/CD28 T Cell Activation Beads

产品编号 C0150
TargetMol 的人 CD3/CD28 T 细胞激活磁珠是一种便捷高效的工具,可用于激活和扩增 T 细胞,无需依赖饲养层细胞(如抗原递呈细胞)或抗原。磁珠直径为 5 µm,由惰性超顺磁材料制成,大小与抗原递呈细胞相当,并且共价偶联了抗 CD3 和抗 CD28 抗体。在细胞培养中,可通过添加重组人 IL-2 促进 T 细胞群体的扩增。激活和扩增完成后,可使用磁力架轻松移除磁珠。
规格价格库存数量
1 mL (for 1×10^8 cells)
¥ 2,398
5日内发货
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TargetMol 的所有产品仅用作科学研究或药证申报,不能被用于人体,我们不向个人提供产品和服务。请您遵守承诺用途,不得违反法律法规规定用于任何其他用途。
实验操作小课堂
Human CD3/CD28 T Cell Activation Beads产品问题解答
阳选与阴选的区别?
阴选是磁珠结合非目的细胞并去除,阳选则是磁珠结合目的细胞,以此分离。阳选需要磁珠和目的细胞解离,但是阴选不用。阴选对细胞伤害小,且纯度一般较高。
小鼠CD8+细胞分选试剂盒(阳选法)(C0068)可以从B6(小鼠)的肾脏提取CD8+T细胞吗?是否能达到脾脏的纯度和分选率?
理论上阳选可以提取,但我们没有具体实验数据,不能保证效果。
小鼠CD4+ T细胞磁珠法分选试剂盒(阴选法)(C0062)可以用胸腺细胞吗?分选效率低的原因?
不建议使用胸腺样本,阴选试剂盒对样本要求比较严格,只适合脾脏和淋巴结。 阴选是拉走非目的细胞,胸腺中非目的细胞的种类可能多于脾脏和淋巴结,所以效率低。 可以试用阳选试剂盒(C0067),但分选出来的是CD4+细胞(包含CD4+T细胞),不全是CD4+T细胞。
小鼠CD8+T细胞磁珠法分选试剂盒(C0063)可以用于肿瘤细胞吗?
不可以。适用于小鼠脾脏和淋巴结CD8+T细胞。 原因:阴选法是磁珠吸附非目的细胞,比如脾脏和淋巴结中的非目的细胞有ABC,3种,而肿瘤中有ABCDE,就会将剩下DE,2种和目的细胞一起被吸附。
小鼠中性粒细胞分选试剂盒 (阴选)(C0064)的分选纯度是多少?
以下是WT小鼠骨髓细胞、脾脏细胞、外周血分选前后纯度: 小鼠骨髓细胞,分选前后CD11b+ Ly6G+中性粒细胞的纯度为:45.72%和95.18%。 小鼠脾脏细胞,分选前后CD11b+ Ly6G+中性粒细胞的纯度为:6.30%和91.84%。 小鼠外周血,分选前后CD11b+ Ly6G+中性粒细胞的纯度分别为:20.04%和93.82%。
常见问题解答
Cocktail 系列的使用方法?
在室温下解冻,开盖前请低速离心一下,以便将黏附于管壁的液体甩至管底。然后在实验前以 1:100(v/v)稀释至溶液样品(细胞裂解液或组织提取液)。
三种磷酸酶抑制剂cocktail的区别
成分功能均不一样,具体信息可在官网进行查询。用哪个需要根据老师的实验需求确定。C0002的抑制范围会相对C0003广泛一点,如果只想买一支又不确定哪个合适的话,推荐C0002。如果想要更全面的抑制,推荐C0004。
TargetMol蛋白酶抑制剂是否可以和其他公司的磷酸酶抑制剂一起使用?
可以一起使用。
使用 CCK8 进行实验后,发现读值低,不变色、没差异等,应该怎么办?
CCK8 在孵育 1-4 小时后,OD 读值在 1-2 之间为佳,线性关系比较好。关于 CCK8 的使用问题,通常建议调整细胞状态、增加种板数量、改变加药浓度、延长孵育时间等。
蛋白酶抑制剂 cocktail C0001 使用时加到蛋白液中的有效抑制时间有多久?
这个我们暂时没有准确的数据,因为它对不同样品不同蛋白的保护程度是不一样的。一般单次提取以后,不加蛋白酶抑制剂 cocktail 的样品蛋白会在 24 h 后发生明显降解,加了蛋白酶抑制剂 cocktail 的样品蛋白可以维持 48 h 不降解。如果提取后置于 -20℃ 储存的话,一般加了蛋白酶抑制剂 cocktail 的样品蛋白可以至少储存一个月,冻融三次;但时间长了或者冻融次数多了的话,蛋白还是会发生降解的,不同蛋白降解时间不一样的。
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Handling Instruction | TargetMol 细胞分选的产品推荐

  1. 小鼠细胞
样本类型 脾脏 淋巴结 外周血 骨髓 肿瘤组织
CD3+ T细胞 C0061 C0061 / / /
CD4+细胞 C0062(首选),C0067(可选) C0062(首选),C0067(可选) C0067 / C0067
CD8+细胞 C0063(首选),C0068(可选) C0063(首选),C0068(可选) C0068 / C0068
中性粒细胞 C0064 / C0064 C0064 /
CD3+ 细胞去除 C0152 C0152 / / /
  1. 人源细胞
样本类型 外周血 脐带血
CD3+ T细胞 C0065 /
CD34+ 细胞富集 C0066 C0066
CD4+ T细胞 C0148 /
CD8+ T细胞 C0149 /
CD3/CD28 T细胞激活 C0150 /
CD66b细胞 C0151 /

Handling Instruction | TargetMol 产品信息

人 CD3 CD28 T 细胞激活磁珠 特性
磁珠浓度 1×10^8 beads/mL
保存液 PBS pH 7.4,含0.1% BSA和0.1% proclin-300

Handling Instruction | TargetMol 产品特点

  • 效率高:无需抗原递呈细胞或抗原,即可快速激活和扩增T细胞,简化实验流程。
  • 活性好:磁珠无细胞毒性,确保T细胞的高活力和功能性。
  • 易操作:无需使用分离柱,通过磁力架即可实现目标细胞分离。

Handling Instruction | TargetMol 产品应用

  • 适用于人外周血单核细胞(PBMC)或T细胞亚群:包括CD3+ T细胞、CD4+ T细胞或CD8+ T细胞。
  • 活化后的T细胞可用于多种实验,例如转染/转导、研究TCR信号通路、蛋白质组学分析或基因表达研究等。此外,活化后的T细胞可继续在培养基中培养,用于分化为辅助性T细胞亚群,或扩增多克隆或抗原特异性的T细胞群体。

Handling Instruction | TargetMol 自备试剂

  • 清洗缓冲液:使用含有2 mM EDTA和2%胎牛血清(FBS)的PBS,或含有2 mM EDTA和0.5% BSA的PBS。需在使用前通过0.22 μm滤膜进行无菌过滤处理。
  • 细胞培养基:采用RPMI 1640培养基,添加2 mM谷氨酰胺和10% FBS(可根据需要加入100 U/mL青霉素-链霉素双抗)。扩增T细胞时,可在培养基中额外加入30 U/mL重组人IL-2(如TMPJ-01463)。此外,也可选择商品化T细胞培养基,其配方中的生长因子可以根据实验需求进行灵活调整。

Handling Instruction | TargetMol 操作说明

以分选后人CD3+ T细胞为例:
一、磁珠清洗

  1. 通过涡旋混匀(>30 s)或在旋转仪上放置5 min,使试管内的磁珠完全悬浮。
  2. 将所需体积的磁珠转移至流式管中,加入等体积清洗缓冲液。如果磁珠体积不足1 mL,补加至1 mL的清洗缓冲液。轻轻涡旋5 s或用移液器反复吹打混匀,注意避免产生气泡(也可直接使用细胞培养基代替清洗缓冲液)。
  3. 将流式管放置在磁力架上静置3 min,待磁珠聚集后弃去上清液。
  4. 按步骤2和3再次清洗磁珠,此次使用细胞培养基作为清洗液。总计清洗磁珠两次。
  5. 用细胞培养基重悬清洗后的磁珠。例如:若使用25 μL磁珠清洗,最后用1 mL细胞培养基重悬磁珠。

二、人T细胞激活(以96孔板为例)

  1. 将T细胞浓度调整至1×10^7 cells/mL,每孔加入25 μL细胞悬液(每孔含2.5×10^5个T细胞),补充培养基使体积达到100 μL。
  2. 向每孔加入100 μL清洗后重悬的磁珠,使磁珠与细胞的比例为1:1(可根据实验需求调整,推荐比例为1:1)。
  3. 将96孔板放入37℃、5% CO₂培养箱中孵育,培养时长根据实验需求决定。
  4. 收集激活后的T细胞,用于后续实验分析。
    :在进行流式检测之前,使用磁力架去除磁珠(包括与细胞结合的磁珠,可通过轻柔吹打使磁珠释放)。此时,细胞悬浮在上清液中。收集上清液后,继续进行后续的流式检测步骤。

三、人T细胞扩增

  1. 调整CD3+ T细胞浓度至1-1.5×10^6 cells/mL,按磁珠与细胞比例1:1添加激活磁珠。
  2. 激活培养2天后,向培养基中加入30 U/mL重组人IL-2。
  3. 将细胞与磁珠置于37℃、5% CO₂培养箱中孵育,具体培养时间视实验需要决定。
  4. 每日观察细胞状态,包括激活与扩增情况,注意细胞形态和大小。当细胞出现皱缩或增殖速度减缓时,可能提示细胞耗竭。
  5. 建议激活初期(前2天)不要处理细胞。2天后定期观察,当培养基变黄或细胞数量过多时,进行换液或传代。每次换液或传代时,需补充30 U/mL重组人IL-2。
  6. 定期计数细胞密度。当细胞密度超过2.5×10^6 cells/mL时,轻柔吹打混匀,调整细胞浓度至0.5-1×10^6 cells/mL。

Handling Instruction | TargetMol 保存条件

4℃,2年。

Handling Instruction | TargetMol 注意事项

  1. 避免冷冻磁珠。磁珠应保存在储存溶液中,防止干燥。
  2. 在从磁珠保存管中取出磁珠之前,应充分震荡以确保均匀悬浮。操作过程中注意避免产生气泡。
  3. 建议使用质量较好的移液器吸头和反应管,以避免因磁珠和溶液附着而造成损失。
  4. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
  5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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