Soluble Starch Synthase(SSS)Activity Assay Kit (UV Spectrophotometry)

Name: Soluble Starch Synthase(SSS)Activity Assay Kit (UV Spectrophotometry)
Brand: TargetMol
SKU: CB0187UV
Rating: 5 (4 reviews)

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产品编号 CB0187UV

别名 可溶性淀粉合成酶（SSS）活性检测试剂盒（紫外分光光度法）

可溶性淀粉合成酶（Soluble starch synthase, SSS, EC 2.4.1.21）通常以游离态存在于质体基质中，催化淀粉链延长，主要负责支链淀粉的合成。可溶性淀粉合成酶（SSS）是参与淀粉合成的最重要酶类之一。

规格	价格	库存	数量
50 T	¥ 3,456	10-12日内发货

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实验操作小课堂

常见问题解答

检测原理

SSS 催化 ADPG 与淀粉引物 (葡聚糖) 反应，将葡萄糖分子转移到淀粉引物上，同时生成 ADP，在反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化 NADP⁺ 还原为 NADPH，NADPH 生成量与前一步反应中 ADP 生成量呈正比，340nm 下测定 NADPH 增加量即可计算 SSS 活性。

产品规格

50T/48S规格的产品组成及保存条件：

编号	规格	储存条件
CB0187UV-ES	50mL×1 瓶	4℃保存；
CB0187UV-A	40mL×1 瓶	4℃保存；
CB0187UV-Powder-1	粉剂×2 支	4℃保存；
CB0187UV-Powder-2	粉剂×2 支	-20℃保存；
CB0187UV-Powder-3	粉剂×2 支	-20℃保存；临用前加入5mL CB0187UV-A充分混匀
CB0187UV-Powder-4	粉剂×2 支	-20℃保存；临用前加入8mL CB0187UV-A充分混匀
CB0187UV-Powder-5	粉剂×2 支	-20℃保存；临用前加入416μL双蒸水充分混匀
CB0187UV-B	250μL×3支	-20℃保存；
CB0187UV-C	12.5ul×2支	4℃保存；每支临用前加入4mL溶解好的CB0187UV-Powder-3
反应液Ⅰ配制	临用前在CB0187UV-Powder-1中加入7mL CB0187UV-A，缓慢加热，逐渐升温使其溶解，冷却后将加入CB0187UV-Powder-2混合溶解。这样可以分两批配制并且测定。

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

操作说明

一、自备用品：
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

二、粗酶液制备
按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0187UV-ES），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2.在 EP 管中按顺序加入下列试剂：

试剂名称	测定管（μL）
样本	200
反应液Ⅰ	270
混匀，30℃保温 20 min，置沸水浴中 1 min（盖紧，防止水分散失），冰浴冷却，
CB0187UV-C	150
混匀，30℃保温 30 min，置沸水浴中 1 min（盖紧，防止水分散失），冰浴冷却，10000g 25℃离心 10min，取上清液。
上清液	450
CB0187UV-Powder-4	300
CB0187UV-Powder-5	15
CB0187UV-B	15
混匀后立即在 340 nm 波长下记录初始吸光度 A1 和 2min 后的吸光度 A2，计算 ΔA=A2-A1。

注意：反应液Ⅰ如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混匀。

四、SSS 活力单位的计算：
1.按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
SSS(U/mg prot)=[ΔA÷(ε×d)×V 测]÷(Cpr×V样÷V反总×V 上清) ÷T =432×ΔA÷Cpr
2.按照样本鲜重计算：
单位的定义：每 g 组织每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
SSS 活性(U/g 鲜重) =[ΔA÷(ε×d)×V 测]÷(W÷V提取×V样÷V反总×V 上清) ÷T =432×ΔA÷W
V 测：测量体积，0.78mL；V反总：反应体积，0.62mL ；V提取：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，2min；ε：NADPH 消光系数，6.22×10^-3mL/(nmol˙cm)；d：石英比色皿光径，1cm；V样本：加入样本的量，0.2mL；V 上清：吸取上清液的量，0.45mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。