Nitrate Reductase Assay Kit (Microanalysis)

Name: Nitrate Reductase Assay Kit (Microanalysis)
Brand: TargetMol
SKU: CB0164M
Rating: 5 (4 reviews)

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产品编号 CB0164M

别名 硝酸还原酶（NR）活性检测试剂盒（微量法）

硝酸还原酶（Nitrate Reductase, NR; EC 1.7.1.3）广泛存在于植物中，是植物硝态氮转化为氨态氮的关键酶，也是诱导酶，对作物的产量和品质有影响。

规格	价格	库存	数量
100 T	¥ 616	4-6日内发货

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实验操作小课堂

常见问题解答

检测原理

硝酸还原酶催化硝酸盐还原为亚硝酸盐，NO₃ˉ +NADH+H^＋→ NO₂ˉ +NAD^＋+H₂O；产生的亚硝酸盐能够在酸性条件下，与对–氨基苯磺酸及α-萘胺定量生成红色偶氮化合物；生成的红色偶氮化合物在 540 nm 有最大吸收峰，可用分光光度法测定。

产品规格

100T/48S规格的产品组成及保存条件：

编号	规格	储存条件
CB0164M-Stock (Inducer)	50mL×1 瓶	4℃保存；
诱导剂应用液配制：用时将诱导剂储备液用蒸馏水10 倍稀释，充分混匀即可。
CB0164M-ES	50mL×1 瓶	4℃保存；
CB0164M-A	10mL×1瓶	-20℃保存；
CB0164M-B	5mL×1瓶	4℃保存；
CB0164M-C	5mL×1瓶	4℃保存（如析出结晶，60度水浴溶解后使用）；
CB0164M-D	5mL×1 瓶	4℃避光保存；
CB0164M-Standard	1 mL×1 支	4℃保存
1μmol/mL 的标准液的配制：用时将CB0164M-Standard储备液蒸馏水10倍稀释，充分混匀即可。

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

操作说明

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。

二、样品测定的前处理：
1.取适量诱导剂于烧杯中，将新鲜标本洗净，滤纸吸干，放入诱导剂应用液中（淹没即可），浸泡 2h，取出样本，滤纸吸干后，-20℃冷冻 30min，取出样本，滤纸吸干。（根据需要进行诱导处理）
2.按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入1mL CB0164M-ES），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

三、测定步骤：
1.分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。
2.在 EP 管或 96 孔板中加入下列试剂：

试剂名称	测定管（µL）	对照管（µL）	标准管（µL）	空白管（µL）
样本	20	20
1μmol/mL 标准液			20
蒸馏水		100		120
CB0164M-A	75		75
CB0164M-B	25		25
混匀后，37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）反应 30min
CB0164M-C	50	50	50	50
CB0164M-D	50	50	50	50
混匀，显色 20min，540nm 处比色，标记为：A测定管、A对照管、A标准管、A空白管；

注意：标准管和空白管只需测1-2次，每个测定管设一个对照管。

四、硝酸还原酶 (NR) 活性计算：
1.按样本鲜重计算：
单位定义：每小时每 g 鲜重样品中催化产生 1μmol NO2ˉ的量为一个 NR 活力单位。
NR (μmol/h/g鲜重) = (C标准管×V1)×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷(W×V1÷V2)÷T = 2×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W
2.按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每小时每 mg 组织蛋白催化产生 1μmol NO2ˉ的量为一个 NR 活力单位。
NR (μmol/h/mg prot) = (C标准管×V1)×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷(V1×Cpr)÷T = 2×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr

注： C 标准管：标准管浓度，1μmol/mL；V1：加入样本体积：0.02mL；V2：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，0.5h；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。