Mag Beads NHS (300 nm)

• 简便，无需活化，可直接与生物配体共价偶联。
• 高效，生物配基偶联效率可达 90% 以上，大大高于羧基磁珠，同时配基的结合载量更高。
• 快速，1~2 h 便可完成生物配基偶联。
• 温和，室温或 4℃偶联，偶联体系 pH 为 5~9。
• 稳定，形成稳定的酰胺键，防止配基脱落。
• 良好的生物相容性，减少非特异性吸附。

• 适用于含伯氨基的蛋白、抗体、酶、多肽、核酸等生物分子的共价偶联。
• 体外诊断：可以快速、准确地检测疾病标志物。
• 免疫检测：磁珠与抗体结合用于捕获和检测特定抗原。
• 细胞分选：磁珠可以与特异性抗体偶联，通过磁性分离技术，从复杂的细胞混合物中分选出目标细胞。
• 免疫沉淀/共沉淀：可以捕获和富集特定蛋白质或核酸。
• 蛋白/抗体分离纯化：磁珠具有高效的结合能力和低非特异性吸附，用于纯化特定蛋白质或抗体，提高目标物质的纯度和回收率。

*磁珠与配体的结合能力与生物配体的本身特性相关，此处仅为参考值。

注：
1. 磁珠洗涤
磁珠洗涤步骤应严格遵循说明书的指示，使用冷却的Washing Buffer A进行快速洗涤，以防止在洗涤过程中NHS基团发生水解，影响后续偶联效果。

2. 蛋白偶联中的Coupling Buffer选择
蛋白偶联时，首先需要通过实验筛选出合适的Coupling Buffer。可选择的缓冲液包括：Coupling Buffer A、Coupling Buffer B、50 mM 硼酸溶液（pH 8.5）、以及100 mM 磷酸缓冲液（含100 mM NaCl，pH 7.4）这四种。根据实验结果确定最适合的缓冲体系，以确保高效的偶联反应。

3. 蛋白浓度选择
在确定了合适的Coupling Buffer后，还需要调整蛋白溶液的浓度。蛋白浓度越高，偶联到磁珠上的蛋白量越大。这是因为NHS基团与蛋白的偶联反应和NHS基团的水解反应同时进行，需要找到最佳平衡点。当然，这要根据使用需求进行优化。如果只需要偶联少量蛋白，使用低浓度蛋白即可满足需求，从而降低成本。

4. 封闭步骤
在封闭步骤中，可以使用试剂盒提供的3 M乙醇胺，或选择Tris缓冲液（100 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，pH 8.0）进行封闭，封闭时间不得少于2 h。如果化学封闭后背景信号依然较高，可以在封闭后额外添加BSA封闭步骤以进一步降低非特异性吸附。

以下为基于500 μL Mag Beads NHS磁珠样品的操作步骤，用户可根据实验需求按比例调整：

1. 蛋白溶液配制
1)用Coupling Buffer将待偶联蛋白溶解，配制成浓度为0.1-3.0 mg/mL的蛋白溶液（若使用Magrose Beads NHS，则浓度应≥3.0 mg/mL）。
2)对于已经储存在buffer中的蛋白，需先透析或脱盐，去除含伯氨基的物质后，再用Coupling Buffer配制蛋白溶液。
3)将配制好的蛋白溶液保存在4ºC备用。
注：
a)蛋白浓度≥2.0 mg/mL有助于提高偶联效率，需综合考虑成本与使用需求。
b)蛋白溶液中应避免含有带伯氨基的成分，如Tris、甘氨酸、明胶、BSA等。

2. 磁珠清洗
1)将磁珠用漩涡振荡器振荡充分混匀，然后使用移液器吸取500 µL磁珠悬液置于1.5 mL EP管中。
2)将EP管放入磁性分离器，静置1 min，进行磁性分离，吸去上清液，取下EP管。
3)向EP管中加入1 mL 2~8ºC的Washing Buffer A，涡旋混匀15 s。进行磁性分离，吸去上清液。
注：NHS基团易水解，应先预冷Washing Buffer A，再进行洗涤。

3. 蛋白质固定
1)向洗涤后的磁珠中立即加入500 μL蛋白溶液，涡旋混匀30 s。
注：需预先配制蛋白溶液，Washing Buffer A洗涤完毕后，应立即加入蛋白溶液进行偶联反应。
2)将EP管涡旋15 s，置于垂直混合仪上，室温混合2 h。为确保均匀反应，可在反应前30 min内，每5 min取下EP管涡旋混匀15 s。之后，每15 min取下EP管涡旋混匀15 s。
注：若需要，可以在4℃下过夜反应。
3)进行磁性分离，保留流穿液以备分析。

4. 磁珠封闭
1)向EP管中加入500 μL Blocking Buffer，涡旋30 s，进行磁性分离，吸去上清液。
2)重复上述封闭操作4次。
3)加入500 μL Blocking Buffer，涡旋混匀30 s，将EP管置于垂直混合仪上，室温反应2 h。
4)进行磁性分离，吸去上清液。
5)向EP管中加入1 mL超纯水，混合均匀后进行磁性分离，吸去上清液。

5. 磁珠保存
1)向EP管中加入1 mL Storage Buffer，充分混合，进行磁性分离，吸去上清液，重复此操作2次。
2)最后，加入500 μL Storage Buffer，混合均匀后，将磁珠储存在4ºC备用。
注：最终偶联蛋白的磁珠浓度为10 mg/mL（若使用Magrose Beads NHS，则为20% (V/V)）。

4℃，1年。

1. 避免对磁珠进行冷冻、干燥和高速离心等操作。
2. 为了减少磁珠的损失，每次磁性分离的时间不应少于1 min。
3. 从磁珠保存管中取出磁珠之前，应充分震荡以确保均匀悬浮。操作过程中注意避免产生气泡。
4. 建议使用质量较好的移液器吸头和反应管，以避免因磁珠和溶液附着而造成损失。
5. 磁珠与溶液混合过程中，如果溶液粘稠导致翻转离心管无法重悬磁珠，可以使用移液器吹打或瞬时漩涡混合，使磁珠充分重悬。
6. 磁珠对水分敏感。为了保证产品质量，在取样之后需立即盖上瓶盖，并用封口膜密封，于4℃保存。
7. 由于NHS基团在280 nm处有吸收峰，磁珠偶联蛋白的结合量不能通过OD280测定，可使用BCA试剂盒（C0050）进行测定。
8. 蛋白稳定剂（如BSA，gelatin）会抑制抗体与磁珠的结合，因此在磁珠偶联抗体过程中，需要确保抗体保存体系中不存在含伯氨基的蛋白稳定剂。
9. 缓冲液中含有带伯胺的物质会抑制蛋白质偶联到磁珠表面，去除伯胺物质可采用透析和脱盐的方法。
10. 蛋白质和磁珠的偶联效率因蛋白质种类和性质差异而不同。一般而言，蛋白质浓度为≥3.0 mg/mL时利于蛋白质偶联，对于不同的蛋白其浓度需要优化。
11. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
12. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• C0098-NHS 磁珠 (300 nm)说明书-中文(1.04 MB)