ER-Tracker Green Staining Solution

1. 兼容性好，可与多重荧光探针共染。
2. 细胞毒性低，适用于活细胞标记研究。
3. 操作简便，检测快速。

内质网成像、内质网应激研究、细胞器共定位实验、药物筛选（观察药物对内质网结构的影响）、疾病诊断研究。

用适宜稀释液（无血清培养基或PBS）将ER-Tracker Green储备液稀释成浓度为1 μM的染色工作液。具体的工作浓度应视实验情况调整。

（1）将贴壁细胞接种在无菌细胞爬片上培养。
（2）吸去旧培养基，但要保持细胞表面呈湿润状态。用HBSS缓冲液（含Ca2+ 和 Mg2+）洗涤细胞1次，每次5 min。
（3）吸去HBSS缓冲液，向细胞加入适量37℃预热的ER-Tracker Green染色工作液，需要使染液覆盖住所有细胞，37℃避光孵育15-30 min。
（4) 吸除ER-Tracker Green工作液，用37℃预热的细胞培养基洗涤2次，每次5 min。
（5）加入37℃预热的细胞培养基覆盖住细胞，置于荧光显微镜下观察。Ex=504 nm，Em=511 nm左右。
（6）（选做）荧光染色后若用4%甲醛固定细胞，可一定程度上保存荧光染色结果。具体操作为：向细胞加入适量4%甲醛，于37℃避光孵育2 min。固定后，用合适的缓冲液洗涤2次，每次5 min。在载玻片上滴加含抗荧光淬灭剂的封片液，将有细胞的那面爬片贴合置于其上，进行封片。最后在荧光显微镜下观察。

-20℃避光保存，半年有效。

1. 实验前应注意保证细胞密度适宜，贴壁细胞汇合度建议在50%-80%，密度过低易导致细胞凋亡，过高则细胞重叠，影响观察。
2. 染色工作液需现用现配，预温至37℃可减少对细胞的刺激。
3. ER-Tracker Green为荧光染料，光照易导致荧光淬灭，操作过程应注意避光。
4. 操作时无需对细胞破膜，若使用Triton X-100破膜会导致ER-Tracker Green荧光完全消失。
5. 为了最大限度减少潜在的假阳性荧光染色，建议使用尽可能低的工作液浓度。
6. 格列本脲活性可能会影响内质网部分功能。
7. 部分细胞中的磺酰脲类受体不定可变表达可能引起非内质网标记。
8. 本品仅适用于专业科研用途，严禁用于临床诊断、治疗、食品或药品领域，且不得存放于住宅等非专业场所。
9. 为保障操作安全与人员健康，操作时请务必穿戴实验服并佩戴一次性手套。