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SYBR Green qPCR Master Mix (No ROX)

Catalog No. C0006

SYBR Green qPCR Master Mix (No ROX) 是一种 2× 浓度的即用型预混液,Mix 中含有热启动DNA Polymerase、SYBR Green I 荧光染料、dNTPs、Mg 2+。使用时,只需加入模板、引物、无菌超纯水便可进Real Time PCR 反应。操作简单方便,降低污染概率。

本品采用的DNA 聚合酶配体可以随温度变化实时调节DNA 聚合酶活性。配方添加了有效抑制非特异性PCR 扩增的因子和提升PCR 反应扩增效率的因子,使定量PCR 可以在宽广的定量区域内获得良好的线性关系, 对靶基因进行准确定量检测,重复性好,可信度高。

TargetMol的所有产品和服务仅用于科学研究,不能被用于人体,我们也不向个人提供产品和服务。
SYBR Green qPCR Master Mix (No ROX)
规格 价格/CNY 货期 数量
200 μL (20 rxns) 待询 - 现货 待询
1 mL (100 rxns) ¥ 192 现货
1 mL * 5 (500 rxns) ¥ 768 现货
1 mL * 20 (2000 rxns) ¥ 2,490 现货
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产品应用

  • 基于荧光定量PCR检测
  • 核酸扩增和基因表达
  • 自动化和高通量的定量基因分型研究
  • 基因组学相关应用

适用机型

本品不含有 ROX Reference Dye,适用于无需校正孔间荧光信号误差的仪器。适用机型如下:
Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon,Opticon 2, Chromo4;
Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;
Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler 2.0;Lightcycler96;
Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid:SmartCycler; Illumina:Eco qPCR.

反应体系(以50 μL和20 μL为例,推荐冰上配制)

组分 体积(μl) 体积(μl) 终浓度
qPCR SYBR Green Master Mix (No ROX) 25 10
Forward Primer (10μM) 1 0.4 0.2μM
Reverse Primer (10μM) 1 0.4 0.2μM
模板DNA X X
无菌超纯水 to 50 to 20
总反应体系 50 20

【注】:使用前务必充分混匀,避免剧烈震荡产生过多气泡。
a) 引物浓度:通常引物终浓度为0.2μM,也可以根据情况在0.1-1.0μM之间进行调整。
b) 模板浓度:如模板类型为未稀释cDNA原液,使用体积不应超过qPCR反应总体积的1\/10。
c) 模板稀释:cDNA原液建议5-10倍稀释,最佳模板加入量以扩增得到的CT值在20-30个循环为好。
d) 反应体系:推荐使用20μl或50μl,以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
e) 体系配制:请于超净工作台内配制,并使用无核酸酶残留的枪头、反应管;推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

扩增程序(两步法)

循环步骤 温度 时间 循环数
预变性 95 °C 5 min 1
变性 95 °C 10 sec 40
退火\/延伸 60 °C 30 sec ★ 40
溶解曲线阶段 仪器默认设置 1

扩增程序(三步法)

循环步骤 温度 时间 循环数
预变性 95 °C 5 min 1
变性 95 °C 10 sec 40
退火 55-60 °C 20 sec 40
延伸 72 °C 20 sec ★ 40
溶解曲线阶段 仪器默认设置 1

【注】高特异性可选择两步法,高效率扩增可选择三步法。
a) 预变性时间:根据不同模板和引物的具体情况可适当缩短至2min。
b) 退火温度和时间:请根据引物和目的基因的长度进行调整。
c) 荧光信号采集(★):请按照仪器使用说明书要求进行实验程序设置,几种常见仪器的时间设定如下:
30 sec以上:Applied Biosystems: StepOne, StepOne Plus,7500 Fast;Roche Applied Science: LightCycler 480;Bio-Rad: CFX96
31 sec以上:Applied Biosystems: 7300
34 sec以上:Applied Biosystems: 7500
d) 熔解曲线:通常情况下可以使用仪器默认程序。

保存条件

  • -20℃避光储存,有效期20个月。
  • 请尽量避免反复冻融,如需频繁使用请先提前分装保存。
  • 产品中含有荧光染料SYBR Green I,保存或配制反应体系时需避免强光照射。

结果分析

  1. 定量实验至少需要三个生物学重复。反应结束后需要确认扩增曲线及熔解曲线;
  2. 扩增曲线:一般CT值的正常范围为15-35之间,其中20-28之间 的定量较为准确。如果CT值过小,则需重新稀释模板;如果CT值过大,则需适当提高模板浓度、提高引物浓度以及调试最佳QPCR程序;
  3. 溶解曲线:通常只有溶解曲线为单峰时,才为有效定量结果。如果溶解曲线出现多峰,则需优化条件重新实验,常见方法通常需要重新设计引物等。

注意事项

  1. SYBR Green Master Mix (No ROX) 在 -80℃ 存放可能会产生白色或淡黄的沉淀,可用手握缓慢溶解,于室温短时间避光放置,轻柔上下颠倒混匀直至沉淀全部消失。不影响试剂性能。
  2. 使用前,请上下轻轻颠倒混匀,避免产生气泡,然后进行短暂的离心,防止因混合不均匀造成反应效果不佳。
  3. 避免反复冻融,防止聚合酶活性下降,可将产品分装保存,以便小剂量的多次使用。
  4. 由于SYBR Green I荧光染料随着时间的推移可能会在光照下褪色,从而导致敏感性下降,因此在存储和使用过程中要避免强光照射。
  5. 由于qPCR反应的高灵敏度,空气或气溶胶的污染可能导致反应失败或结果不准确。因此请使用无菌的针尖、灭菌过的试管和移液管在清洁的环境中进行qPCR反应
  6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作,再配置反应体系或者分装时请一定使用新(无污染)枪头、Microtube 等,避免污染。
  7. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品。

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文献引用

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