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HMGCS Assay Kit (Microanalysis)

Name: HMGCS Assay Kit (Microanalysis)
Brand: TargetMol
SKU: CB0242M
Rating: 4.5 (1 reviews)

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货号 CB0242M

别名 羟甲基戊二酰辅酶A合成酶活性检测试剂盒（微量法）

羟甲基戊二酰辅酶A 合成酶（HMGCS）是甲羟戊酸代谢途径中的关键酶，催化乙酰CoA 与乙酰乙酰CoA生成羟甲基戊二酰CoA。

HMGCS Assay Kit (Microanalysis)

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货号 CB0242M 别名 羟甲基戊二酰辅酶A合成酶活性检测试剂盒（微量法）

羟甲基戊二酰辅酶A 合成酶（HMGCS）是甲羟戊酸代谢途径中的关键酶，催化乙酰CoA 与乙酰乙酰CoA生成羟甲基戊二酰CoA。

规格	价格	库存	数量
100 T	¥ 8,190	10-12日内发货

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实验操作小课堂

常见问题解答

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产品操作手册

产品介绍

生物活性

产品描述	羟甲基戊二酰辅酶A 合成酶（HMGCS）是甲羟戊酸代谢途径中的关键酶，催化乙酰CoA 与乙酰乙酰CoA生成羟甲基戊二酰CoA。
别名	羟甲基戊二酰辅酶A合成酶活性检测试剂盒（微量法）

检测原理

HMGCS 催化乙酰CoA 与乙酰乙酰CoA 生成羟甲基戊二酰CoA，同时产生CoASH，使DTNB转化为黄色的TNB，在412nm 下有特征吸光值。

产品规格

100T/96S规格的产品组成及保存条件：

编号	规格	储存条件
CB0242M-ES	100mL×1瓶	4℃保存；
CB0242M-A	粉剂×1 瓶	-20℃避光保存；临用前加入3mL 蒸馏水充分溶解待用；剩余试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
CB0242M-B	粉剂×1 瓶	-20℃避光保存；临用前加入3mL 蒸馏水充分溶解待用；剩余试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
CB0242M-C	6mL×1 瓶	4℃避光保存。

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

操作说明

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

二、样本的前处理：
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
1.细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：CB0242M-ES体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL CB0242M-ES），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：CB0242M-ES体积（mL）为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL CB0242M-ES），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2.血清（浆）样品：直接检测。

三、测定步骤：
1.分光光度计或酶标仪预热30min 以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。
2.样本测定（在微量石英比色皿或96孔板中加入）：

试剂名称	测定管（μL）
CB0242M-A	25
CB0242M-B	25
CB0242M-C	50
混匀
样本上清	100
迅速混匀后，立即在412nm波长下记录初始吸光值A1和4min后的吸光值A2。计算ΔA=A2-A1。

四、HMGCS酶活性计算：
a. 使用微量石英比色测定的计算公式如下：
1.血清（浆）活性
单位定义：每mL 血清（浆）每分钟催化产生1nmol TNB 为一个酶活力单位。
HMGCS (U /mL) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹] ÷V样÷T = 36.76×ΔA
2.组织、细菌或细胞HMGCS 活性
(1)按样本蛋白浓度计算
单位定义：每mg 组织蛋白每分钟催化产生1nmol TNB 为一个酶活力单位。
HMGCS (U/mg prot) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V样×Cpr)÷T = 36.76×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义：每g 组织每分钟催化产生1nmol TNB 为一个酶活力单位。
HMGCS (U/g 鲜重) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W ×V样÷V样总)÷T = 36.76×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算
单位定义：每1 万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol TNB 为一个酶活力单位。
HMGCS (U/10⁴ cel) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(500×V样÷V样总)÷T = 0.074×ΔA
注：V反总：反应体系总体积，2×10^-4 L；ε：TNB 摩尔消光系数，1.36×10⁴ L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.1 mL；V样总：加入CB0242M-ES 体积，1mL；T：反应时间，4 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万。
蛋白定量检测建议使用本公司： BCA Protein Assay Kit

b. 使用96孔板测定的计算公式如下：
1.血清（浆）活性
单位定义：每mL 血清（浆）每分钟催化产生1nmol TNB 为一个酶活力单位。
HMGCS (U/mL) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷V样÷T = 73.53×ΔA
2.组织、细菌或细胞HMGCS 活性
(1)按样本蛋白浓度计算
单位定义：每mg 组织蛋白每分钟催化产生1nmol TNB 为一个酶活力单位。
HMGCS (U/mg prot) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V样×Cpr)÷T = 73.53×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义：每g 组织每分钟催化产生1nmolTNB 为一个酶活力单位。
HMGCS (U/g 鲜重) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W ×V样÷V样总)÷T = 73.53×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算
单位定义：每1 万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol TNB 为一个酶活力单位。
HMGCS (U/10⁴ cel) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(500×V样÷V样总)÷T = 0.147×ΔA
注：V反总：反应体系总体积，2×10^-4 L；ε：TNB 摩尔消光系数，1.36×10⁴ L/mol/cm；d：96孔板光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.1 mL；V样总：加入CB0242M-ES 体积，1 mL；T：反应时间，4 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万。

注意事项

1.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

计算器

摩尔浓度计算器
稀释计算器
配液计算器
分子量计算器

体内实验配液计算器

请在以下方框中输入您的动物实验信息后点击计算，可以得到母液配置方法和体内配方的制备方法：

比如您的给药剂量是10 mg/kg，每只动物体重20g，给药体积100 μL， TargetMol | Animal experiments

一共给药动物10只，您使用的配方为5% TargetMol | reagent

DMSO + 30%PEG300 + 5%Tween 80 + 60%Saline/PBS/ddH₂O ，那么您的工作液浓度为2mg/mL。

母液配置方法: 2 mg 药物溶于 50 μLDMSO TargetMol | reagent

（母液浓度为 40 mg/mL ）, 如您需要配置的浓度超过该产品的溶解度，请先与我们联系。

体内配方的制备方法: 取 50μLDMSO TargetMol | reagent

母液，添加 300 μLPEG300 TargetMol | reagent

混匀澄清，再加 50μLTween80, 混匀澄清，再加 600μLSaline/PBS/ddH₂O TargetMol | reagent

混匀澄清

以上为“体内实验配液计算器”的使用方法举例，并不是具体某个化合物的推荐配制方式，请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解方案。

方案所需的各类助溶剂如： DMSO ， PEG300 / PEG400 ， Tween 80 ， SBE-β-CD ，玉米油等，均可在TargetMol网站点击购买。

剂量转换

对于不同动物的给药剂量换算，您也可以参考更多

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