X-GAL (BCIG) is a widely used substrate of chromogenic β-galactosidase. β-galactosidase cleaves X-GAL and produces an insoluble blue compound.

使用方法：
一、溶液配置
母液配置： 配制 X-GAL 储存液:溶解 X-GAL 于无水二甲基甲酰胺（DMF）或二甲基亚砜（DMSO）中，配制成 20 mg/mL 的储存液。
注意事项：避光、小体积分装（如 50–100 μL），-20°C 保存。储存时间不宜过长，避免降解。
二、操作步骤
1. 配制显色反应混合物
1）对于平板筛选： 在 LB 琼脂平板中加入 X-GAL 和 IPTG（异丙基-β-D-硫代半乳糖苷）。常用终浓度：X-GAL 40 µg/mL，IPTG 0.1 mM。在琼脂培养基冷却至 50°C 左右时加入 X-GAL 和 IPTG，混匀后倒板。
2）.对于液体显色： 在反应缓冲液中加入 X-GAL 和 IPTG，常用浓度与平板筛选相同。
2. 实验应用
蓝白筛选：
1）将含有报告基因（如 lacZ 或 lacZα）的载体转化到宿主菌（如 E. coli DH5α）中。
2）涂布于含有 X-GAL 和 IPTG 的平板上，37°C 培养 12–16 小时。
3）筛选结果：蓝色菌落表示β-gal活性阳性（lacZ 表达），白色菌落表示阴性（lacZ 不表达）。
组织染色：
1）在适当的组织固定和透化后，使用含 X-GAL 的反应缓冲液（通常为 pH 7.2–7.5 的 PBS，含 Mg²⁺）。
2）在 37°C 下孵育 12–24 小时，显色结果用显微镜观察蓝色沉淀。