• C0001 蛋白酶抑制剂 Cocktail (EDTA-Free, 100× in DMSO)

• C0045 RIPA裂解液(强)

• C0050 BCA蛋白浓度测定试剂盒

• C0190 SDS-PAGE蛋白上样缓冲液 (5×)

• C0187 考马斯亮蓝快速染色试剂盒

• C2003 特超敏 ECL 化学发光底物

• 耐受性强：耐受6 M盐酸胍, 8 M尿素, 5 M NaCl, 50 mM DTT, 50 mM β-ME, 50 mM EDTA, 2%吐温-20, 0.25 M 咪唑。
• 高亲和力与高特异性：对Strep-tag II和Twin Strep-tag II具有更高亲和力，有效降低非特异性蛋白污染。
• 温和洗脱条件：可使用生物素进行竞争性洗脱，无需强变性或极端条件，有助于保持目标蛋白的天然构象与生物活性。

• 适用于从多种表达系统（包括杆状病毒、哺乳动物细胞、酵母及细菌）中高效纯化带有 Strep-tag II 或 Twin Strep-tag II 标签的重组蛋白。

1. 样品准备
样品上样前建议进行离心处理，并通过0.22 μm或0.45 μm滤膜过滤，以去除颗粒杂质，提高蛋白纯化效率。
2. 凝胶装填
1）选择合适规格的亲和层析柱，安装底部垫片后，加入适量去离子水润洗柱管及垫片，并关闭下出口。
2）充分混匀Strep-Tactin XT (Strep-tag Ⅱ) 琼脂糖凝胶，吸取适量浆液加入层析柱中，打开下出口使保护液自然流出。
3）加入适量去离子水冲洗凝胶，待液体流尽后关闭下出口。
4）使用平衡/洗杂液对装填好的层析柱进行平衡；如暂不使用，可加入保护液，置于 2–8℃ 保存。
3. 样品纯化
3.1 孵育法纯化
1）根据样品量取适量Strep-Tactin XT (Strep-tag Ⅱ) 琼脂糖凝胶于离心管中，1000 rpm离心1 min，弃去上清。
2）加入5倍凝胶体积的平衡/洗杂液清洗凝胶，1000 rpm离心1 min，弃上清，重复至少2次。
3）加入样品，在2–8℃条件下置于旋转混匀仪孵育2–4 h或孵育过夜。
4）孵育结束后，1000 rpm离心1 min，将上清转移至新离心管中（作为流穿组分保留，用于后续分析）。
5）加入5倍凝胶体积的平衡/洗杂液清洗凝胶，1000 rpm离心1 min，弃上清（避免吸取凝胶），重复3–5次，过程中建议更换离心管。
6）加入3–5倍凝胶体积的洗脱液进行洗脱，室温孵育5–15 min，1000 rpm离心1 min收集洗脱液，可重复2–3次。
3.2 层析柱法纯化
溶液用量按柱体积计算，例如5倍柱体积（CV），1 mL规格对应5 mL溶液，10 mL规格对应为50 mL溶液。
1）使用5倍柱体积的平衡/洗杂液对层析柱进行平衡，使凝胶处于与目标蛋白一致的缓冲体系中，重复2–3次。
2）将样品加入已平衡的层析柱中，置于旋转混匀仪孵育30–60 min，收集流出液。可重复上样以提高结合效率。
3）使用10–15倍柱体积的平衡/洗杂液进行洗杂，以去除非特异性结合蛋白，收集洗杂组分。
4）使用5–10倍柱体积的洗脱液进行洗脱，按柱体积分段收集（每1倍柱体积收集一管），分别检测，以获得高纯度和高浓度的目标蛋白。
3.3 SDS-PAGE 检测
将原始样品及纯化过程中获得的各组分（流穿、洗杂及洗脱）进行SDS-PAGE分析，以评估纯化效果。
4. 凝胶再生与保存
1）再生：每次使用后建议对凝胶进行再生处理，以去除结合的 D-生物素并保证重复使用性能。操作步骤如下：
依次用5倍柱体积去离子水清洗 → 10倍柱体积再生液处理 → 再用5倍柱体积去离子水清洗。
2）保存：再生后的凝胶应置于等体积保护液中，于 2–8℃ 保存，以防止微生物污染。

4℃，2年。

1. 凝胶应保存在储存溶液中，防止干燥。
2. 在从保存管中取出琼脂糖凝胶之前，应充分震荡以确保均匀悬浮。操作过程中注意避免产生气泡。
3. 操作者可根据实际需求，利用抗体结合反应步骤和抗原结合反应步骤中收集的上清液，检测抗体、抗原与凝胶的结合情况。
4. 在IP实验中，不同类型的抗体和抗原结合的亲和力会有所不同。如果使用本试剂盒提供的缓冲体系未能获得理想的实验结果，操 作者可以自行筛选和配制缓冲液进行实验。
5. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。