PLD Assay Kit (Spectrophotometry)

Name: PLD Assay Kit (Spectrophotometry)
Brand: TargetMol
SKU: CB0285S
Rating: 5 (4 reviews)

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产品编号 CB0285S

别名 磷脂酶D活性检测试剂盒（分光光度法）

磷脂酶D（Phospholipases D, PLD; EC3.1.4.4）即磷脂酰胆碱水解酶，是催化磷酸二酯键水解和碱基交换反应的一类酶的总称，广泛存在于高等动植物和细菌等多种生物体中，具有参与细胞脂质代谢、信号传导、生物膜形成的抗逆境胁等生理功能。

规格	价格	库存	数量
50 T	¥ 6,090	10-12日内发货

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实验操作小课堂

常见问题解答

检测原理

磷脂酶D催化水解磷脂酰胆碱末端的磷脂酰二酯键生成磷脂酸和胆碱，胆碱在胆碱氧化酶催化作用下生成甜菜碱和过氧化氢，过氧化氢在过氧化氢酶的作用下将4-氨基安替比林和重蒸酚氧化成粉红色物质，在500nm处有特征吸收峰。

产品规格

50T/48S规格的产品组成及保存条件：

编号	规格	储存条件
CB0285S-ES	50mL×1瓶	4℃保存
CB0285S-A	55mL×瓶	4℃避光保存
CB0285S-B	8mL×1瓶	4℃避光保存
CB0285S-C	粉剂×1支	-20℃避光保存。临用前加3mL无水乙醇充分溶解；剩余试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
CB0285S-D	35mL×1瓶	4℃避光保存
CB0285S-Standard	1mL×1支	4℃避光保存

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

操作说明

一、自备用品：
可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、天平、研钵、超速冷冻离心机、恒温水浴锅，无水乙醇。

二、酶液提取
1.组织：按照质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL CB0285S-ES）加入CB0285S-ES，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心5min，取全部上清于4℃、100000g离心30min，弃上清，取沉淀溶于1mL CB0285S-A。
2.细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL CB0285S-ES），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后于4℃，10000g离心5min，取全部上清于4℃、100000g离心30min，弃上清，取沉淀溶于1mL CB0285S-A。
3.血清：直接测定。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热30 min，调节波长到500nm，蒸馏水调零。
2.样本测定（在PE管中加入）

试剂名称	空白管（µL）	标准管（µL）	测定管（µL）
CB0285S-A	100
CB0285S-B	150	150	150
标准品		100
样品			100
CB0285S-C	50	50	50
充分混匀，30℃反应30min，沸水浴10min，打开盖子，自然冷却5min。
CB0285S-D	700	700	700
30℃反应30min，于1mL玻璃比色皿，空白管调零，测定500nm处吸光值，分别记为A标准管和A测定管。

四、PLD酶活计算公式：
1.按照蛋白浓度计算：
酶活性定义：每毫克蛋白每分钟水解磷脂酰胆碱产生1nmol胆碱所需的酶量为一个酶活力单位。
PLD活性 (U/mg prot) = (A测定管÷A标准管)×C标准÷Cpr÷T = 16.7×(A测定管÷A标准管)÷Cpr
2.按照样本质量计算：
酶活性定义：每克组织每分钟水解磷脂酰胆碱产生1nmol胆碱所需的酶量为一个酶活力单位。
PLD活性 (U/g 鲜重) = (A测定管÷A标准管)×C标准÷W÷T = 16.7×(A测定管÷A标准管)÷W
3.按照细胞数量计算
酶活性定义：每10⁴个细胞每分钟水解磷脂酰胆碱产生1nmol胆碱所需的酶量为一个酶活力单位。
PLD活性 (U/10⁴ cell) = (A测定管÷A标准管)×C标准÷细胞数量÷T = 16.7×(A测定管÷A标准管)÷细胞数量
4.按照液体体积计算
酶活性定义：每毫升血清每分钟水解磷脂酰胆碱产生1nmol胆碱所需的酶量为一个酶活力单位。
PLD活性 (U/mL) = (A测定管÷A标准管)×C标准÷T=16.7×(A测定管÷A标准管)
注：C标准：标准品浓度，500nmol/mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g/mL；T：反应时间，30min。

注意事项

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.显色完成后，若有沉淀，于8000rpm，25℃离心5min后取上清测定。
3.吸光值不宜超过1，否则用试剂A将酶液进行稀释，并在计算公式中乘以稀释倍数。
4.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。