Mitochondrial Membrane Potential Detection Kit (Rhodamine 123)

Name: Mitochondrial Membrane Potential Detection Kit (Rhodamine 123)
Brand: TargetMol
SKU: C0176
Rating: 5 (4 reviews)

还可以

产品编号 C0176

别名 线粒体膜电位检测试剂盒 (Rhodamine 123)

TargetMol线粒体膜电位检测试剂盒（Rhodamine 123）是一种以Rhodamine 123为荧光探针，专用于快速检测线粒体膜电位（ΔΨm）动态变化的试剂盒。线粒体膜电位（ΔΨm）指线粒体内膜两侧的电位差，其形成与维持对线粒体的能量代谢、物质运输及细胞生存至关重要，是反映线粒体功能的重要指标。
罗丹明123（Rhodamine 123）是一种带正电荷的脂溶性荧光染料，可自由穿过细胞膜进入细胞质，其在胞质中呈游离状态，发出的荧光微弱。在正常生理状态下，线粒体通过电子传递链维持内膜两侧的电化学梯度（内膜内侧为负、外侧为正），带正电荷的Rhodamine 123受电化学梯度驱动经内膜孔道进入线粒体基质，并与基质中的蛋白质或脂质结合，发出明亮的绿色荧光（最大激发波长507 nm，最大发射波长529 nm）。而当细胞凋亡、氧化应激或药物损伤等导致线粒体膜电位去极化时，电化学梯度减弱，染料从线粒体释放至胞质，荧光强度随之减弱。通过检测荧光强度的变化即可反映线粒体膜电位状态，从而用于细胞凋亡检测。
本试剂盒适用范围广泛，兼容细胞、组织及纯化线粒体等多种样本类型，并且能适配荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计及流式细胞仪等多种检测仪器。

规格	价格	库存	数量

大包装 & 定制

TargetMol 的所有产品仅用作科学研究或药证申报，不能被用于人体，我们不向个人提供产品和服务。请您遵守承诺用途，不得违反法律法规规定用于任何其他用途。

实验操作小课堂

常见问题解答

产品组成

产品编号	产品名称	浓度	溶剂	规格
C0176-1	Rhodamine 123	20 mM	DMSO	100 μL
C0176-2	CCCP	10 mM	DMSO	20 μL

产品特点

灵敏度高。
对照体系完善。
细胞毒性低。
探针稳定性好。
适用性广，能用于多种样本类型。

产品应用

凋亡早期线粒体膜电位检测、线粒体靶向药物开发、线粒体功能与代谢疾病研究、衰老细胞线粒体功能衰退研究。

工作液配制

用适宜稀释液（无血清培养基或PBS）将储备液稀释成浓度为1-20 μM的工作液。
本试剂盒若用于6孔板，工作液浓度为20 μM，每孔检测体积为1 mL，则可检测100次；若用于96孔板，工作液浓度为20 μM，每孔检测体积为100μL，则可检测1000次。

使用说明

对照组设置：
（1）阳性对照组（CCCP组）：CCCP是一种常用的解偶联剂，其作为质子载体可携带质子穿过线粒体内膜，消除膜两侧的质子浓度差，线粒体膜电位依赖于质子梯度的维持，CCCP的作用会导致线粒体膜电位迅速下降。CCCP能诱导线粒体膜电位丧失，在线粒体膜电位检测实验中常被用作阳性对照。
具体步骤为：用无血清培养基将CCCP储备液（10 mM）稀释成浓度为10 µM的CCCP工作液。吸除旧培养基，向细胞加入CCCP工作液，处理20-30 min。然后按下述对悬浮细胞或贴壁细胞进行Rhodamine 123染色的步骤，加入适量Rhodamine 123工作液，进行线粒体膜电位检测。10 µM CCCP处理20-30 min几乎能诱导大多数细胞的线粒体膜电位丧失，经Rhodamine 123染色后观察到微弱绿色荧光或几乎无荧光；线粒体膜电位正常的细胞经Rhodamine 123染色后可观察到明亮的绿色荧光。
（2）阴性对照组（溶剂对照组）：细胞不进行药物处理或其他干预，进行Rhodamine 123染色，排除药物本身或实验操作导致的非特异性荧光干扰。
（3）空白对照组：细胞不用药物处理，也不经Rhodamine 123染色，用于检测自发荧光或背景信号。
对于悬浮细胞：
（1）将细胞悬液以600×g室温离心5 min，弃上清。加入37℃预热的PBS重悬细胞，以600×g室温离心5 min，弃上清，收集细胞沉淀。
（2）加入适量Rhodamine 123染色工作液重悬细胞，调整细胞密度为5×10^5-1×10^6 cells/mL，将细胞转移至37℃细胞培养箱中避光孵育20-60 min。
（3）孵育结束后，以600×g、室温离心5 min，弃上清。
（4）加入37℃预热的PBS重悬细胞，以600×g、室温离心5 min，弃上清。重复此步骤1次。
（5）加入适量37℃预热的细胞培养基重悬细胞，在荧光显微镜或激光共聚焦显微镜下观察染色情况，也可以用流式细胞仪或荧光分光光度计检测染色结果。Ex=507 nm，Em=529 nm左右。
对于贴壁细胞：
（1）吸除培养液，加入37℃预热的PBS洗涤细胞1次。
（2）加入适量Rhodamine 123染色工作液，将细胞转移至37℃细胞培养箱中避光孵育20-60 min。
（3）孵育结束后，吸除染色液，用37℃预热的PBS洗涤细胞2次。
（4）加入37℃预热的细胞培养基覆盖住细胞，在荧光显微镜或激光共聚焦显微镜下观察。Ex=507 nm，Em=529 nm左右。
注：若需要用流式细胞仪或荧光分光光度计检测贴壁细胞，可先用胰蛋白酶对贴壁细胞进行消化，收集、重悬细胞后参照上述悬浮细胞的操作步骤进行线粒体膜电位检测。

储存条件

-20ºC避光保存，一年有效。

注意事项

由于样本类型和实验环境的不同均会影响染色效率，建议通过预实验来优化Rhodamine 123工作液浓度和染色时间。
CCCP的最佳工作浓度和处理时间也可能因为样本不同而有差异，可通过预实验调整最佳条件，建议工作浓度范围是1-20 µM。
Rhodamine 123荧光探针适用于活细胞的线粒体膜电位检测，而不适用于固定细胞或固定组织的线粒体膜电位检测。
Rhodamine 123属于荧光染料，光照易导致荧光淬灭，操作过程应注意避光，染色工作液建议现配现用。
本品仅适用于专业科研用途，严禁用于临床诊断、治疗、食品或药品领域，且不得存放于住宅等非专业场所。
为保障操作安全与人员健康，操作时请务必穿戴实验服并佩戴一次性手套。