Mitochondrial Membrane Potential Detection Kit (JC-1)

Name: Mitochondrial Membrane Potential Detection Kit (JC-1)
Brand: TargetMol
SKU: C0174
Rating: 5 (4 reviews)

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产品编号 C0174

别名 线粒体膜电位检测试剂盒 (JC-1)

TargetMol线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）是一种以JC-1为荧光探针，专用于快速检测线粒体膜电位（ΔΨm）动态变化的试剂盒。线粒体膜电位（ΔΨm）指线粒体内膜两侧的电位差，其形成与维持对线粒体的能量代谢、物质运输及细胞生存至关重要，是反映线粒体功能的重要指标。
JC-1是一种常用于线粒体膜电位检测的亲脂性阳离子荧光探针，全称为5,5′,6,6′-四氯-1,1′,3,3′-四乙基苯并咪唑羰花菁碘化物。JC-1可自由穿透细胞膜，它在不同的线粒体膜电位条件下聚集状态会发生变化，其检测线粒体膜电位的原理为：线粒体膜电位较高时，JC-1通过跨膜电位驱动进入线粒体基质，因基质内高浓度环境形成聚集体（J-aggregates）。此时，JC-1分子间相互作用改变荧光特性，被激发后发红色荧光（最大激发波长585 nm，最大发射波长590 nm）。当线粒体膜电位降低时（如细胞凋亡早期），JC-1无法在基质中聚集，以单体形式存在，被激发后发绿色荧光（最大激发波长514 nm，最大发射波长529 nm）。通过检测细胞内红/绿荧光的相对强度比值，可衡量线粒体膜电位的变化，进而反映细胞的凋亡状态等。
本试剂盒适用范围广泛，兼容细胞、组织及纯化线粒体等多种样本类型，并且能适配荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计及流式细胞仪等多种检测仪器。

规格	价格	库存	数量

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实验操作小课堂

常见问题解答

产品组成

产品编号	产品名称	浓度	溶剂	规格
C0174-1	JC-1	400 μM	DMSO	100 μL × 5
C0174-2	CCCP	10 mM	DMSO	20 μL

产品特点

灵敏度高。
对照体系完善。
细胞毒性低。
探针稳定性好。
兼容性好，可与多重荧光探针共染（如Annexin V-FITC等）。

产品应用

凋亡早期线粒体膜电位检测、线粒体靶向药物开发、线粒体功能与代谢疾病研究、衰老细胞线粒体功能衰退研究。

工作液配制

用适宜稀释液（无血清培养基或PBS）将储备液稀释成浓度为2 μM的工作液。
本试剂盒若用于6孔板，工作液浓度为20 μM，每孔检测体积为1 mL，则可检测100次；若用于96孔板，工作液浓度为20 μM，每孔检测体积为100μL，则可检测1000次。

使用说明

对照组设置：
（1）阳性对照组（CCCP组）：CCCP是一种常用的解偶联剂，其作为质子载体可携带质子穿过线粒体内膜，消除膜两侧的质子浓度差，线粒体膜电位依赖于质子梯度的维持，CCCP的作用会导致线粒体膜电位迅速下降。CCCP能诱导线粒体膜电位丧失，在线粒体膜电位检测实验中常被用作阳性对照。
具体步骤为：用无血清培养基将CCCP储备液（10 mM）稀释成浓度为10 µM的CCCP工作液。吸除旧培养基，向细胞加入CCCP工作液，处理20-30 min。然后按下述对悬浮细胞或贴壁细胞进行JC-1染色的步骤，加入适量JC-1工作液，进行线粒体膜电位检测。10 µM CCCP处理20-30 min几乎能诱导大多数细胞的线粒体膜电位丧失，经JC-1染色后观察到绿色荧光；线粒体膜电位正常的细胞经JC-1染色后可观察到红色荧光。
（2）阴性对照组（溶剂对照组）：不进行药物处理或其他干预，排除药物本身或实验操作导致的非特异性荧光干扰。
（3）空白对照组：细胞不用药物处理，也不经JC-1染色，用于检测自发荧光或背景信号。
对于悬浮细胞：
（1）将细胞悬液以600×g、4℃离心4 min，弃上清。加入PBS重悬细胞，以600×g、4℃离心4 min，弃上清，收集细胞沉淀。
（2）加入适量JC-1染色工作液重悬细胞，调整细胞密度为5×10^5-1×10^6 cells/mL，将细胞转移至37℃细胞培养箱中避光孵育20 min。
（3）孵育结束后，以600×g、4℃离心4 min，弃上清。
（4）加PBS重悬细胞，以600×g、4℃离心4 min，弃上清。重复此步骤1次。
（5）加入适量PBS重悬细胞，在荧光显微镜或激光共聚焦显微镜下观察染色情况，也可以用流式细胞仪或荧光分光光度计检测染色结果。
对于贴壁细胞：
（1）吸除培养液，加入PBS洗涤细胞1次。
（2）加入适量JC-1染色工作液，将细胞转移至37℃细胞培养箱中避光孵育20 min。
（3）孵育结束后，吸除染色液，用PBS洗涤2次。
（4）加入适量PBS覆盖住细胞，在荧光显微镜或激光共聚焦显微镜下观察。
注：若需要用流式细胞仪或荧光分光光度计检测贴壁细胞，可先用胰蛋白酶对贴壁细胞进行消化，收集、重悬细胞后参照上述悬浮细胞的操作步骤进行线粒体膜电位检测。
结果检测：
检测荧光时不必把激发光和发射光设置在最大激发/发射波长处，检测绿色荧光时可以设置激发光波长为490 nm，发射光波长为530 nm；检测红色荧光时，可以设置激发光波长为525 nm，发射光波长为590 nm。

储存条件

-20ºC避光保存，一年有效。

注意事项

由于样本类型和实验环境的不同均会影响染色效率，建议通过预实验来优化JC-1工作液浓度和染色时间。
CCCP的最佳工作浓度和处理时间也可能因为样本不同而有差异，可通过预实验调整最佳条件，建议工作浓度范围是1-20 µM。
JC-1荧光探针适用于活细胞的线粒体膜电位检测，而不适用于固定细胞或固定组织的线粒体膜电位检测。
JC-1属于荧光染料，光照易导致荧光淬灭，操作过程应注意避光。
本品仅适用于专业科研用途，严禁用于临床诊断、治疗、食品或药品领域，且不得存放于住宅等非专业场所。
为保障操作安全与人员健康，操作时请务必穿戴实验服并佩戴一次性手套。