Hydroxyproline Assay Kit (Microanalysis)

Name: Hydroxyproline Assay Kit (Microanalysis)
Brand: TargetMol
SKU: CB0138M
Rating: 5 (4 reviews)

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产品编号 CB0138M

别名 羟脯氨酸（HYP）含量检测试剂盒（微量法）

羟脯氨酸（Hydroxyproline，HYP）是机体胶原蛋白主要成分之一，胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和血管等，因此 HYP 含量是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。

规格	价格	库存	数量
100 T	¥ 1,253	10-12日内发货

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实验操作小课堂

常见问题解答

检测原理

羟脯氨酸在氧化剂的作用下所产生的氧化产物与二甲氨基苯甲醛作用呈现紫红色，根据其呈色的深浅可推算出其含量。

产品规格

100T/96S规格的产品组成及保存条件：

编号	规格	储存条件
CB0138M-ES	6mol/L盐酸（自备）	浓盐酸（37%）：H₂O（V/V）= 1:1，室温保存
CB0138M-A1	粉剂×1 瓶	4℃保存；临用时将粉剂先加A2 10mL充分溶解（一定要确保完全溶解）；然后再A3 20mL充分混匀，配好后的试剂 4℃可保存3个月；
CB0138M-A2	10mL×1 瓶	4℃保存；临用时将粉剂先加A2 10mL充分溶解（一定要确保完全溶解）；然后再A3 20mL充分混匀，配好后的试剂 4℃可保存3个月；
CB0138M-A3	20mL×1 瓶	4℃保存；临用时将粉剂先加A2 10mL充分溶解（一定要确保完全溶解）；然后再A3 20mL充分混匀，配好后的试剂 4℃可保存3个月；
CB0138M-B	30ml×1 瓶	4℃避光保存
CB0138M-C1	粉剂×1 瓶	4℃保存；临用时将粉剂加到30mL溶剂中充分溶解，配好后 4℃避光可保存1个月；
CB0138M-C2	30mL×1 瓶	4℃保存；临用时将粉剂加到30mL溶剂中充分溶解，配好后 4℃避光可保存1个月；
CB0138M-Standard（5mg/Each）	粉剂×1 支	4℃保存，测试前将标准品用1ml双蒸水溶解配成5mg/mL的标准贮备液，4℃可保存2周。

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

操作说明

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、水浴锅、天平、烘箱、玻璃管、离心机、可调式移液枪、研钵、6mol/L 盐酸、10mol/L NaOH和蒸馏水。

二、羟脯氨酸提取：
1.组织：称取约 0.2g 样本于玻璃管，将组织尽量剪碎以便消化，盖子稍松不密闭。加入 2mL 的提取液，煮沸或 110℃烘箱 2至6 小时消化至没有可见大的团块，冷却后用 10mol/L NaOH（约1mL）调节 pH 值至 6-8 范围内，再用蒸馏水定容至 4mL，最后16000rpm，25℃，离心 20min（若离心后仍有杂质，可通过过滤去除），取上清待测（过程中可能有黑色物质生成，若长时间不能消化，可能为碳化的物质，不影响实验）。
2.细胞：取 500 万个细胞，加入 1mL 的提取液，煮沸或 110℃烘箱2至6小时消化至透明状，冷却后用 10mol/L NaOH（约 0.5mL）调节 pH 值至 6-8 范围内，蒸馏水定容至 2mL，16000rpm，25℃，离心 20min，取上清待测。

三、测定步骤：
1.分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 560nm，蒸馏水调零。
2.将标准品用蒸馏水稀释为 10、7.5、5、2.5、1.25、0.625μg/mL 的标准溶液。
3.在 EP 管中加入下列试剂：

试剂名称	空白管（µL）	测定管（µL）	标准管（µL）
蒸馏水	100
样本		100
标准品			100
CB0138M-A	50	50	50
混匀，室温静置10min
CB0138M-B	50	50	50
混匀，室温静置5min
CB0138M-C	50	50	50
混匀，60℃，20min水浴，取出后室温静置 15 min，3500 转/分离心10分钟，取 200µL于微量玻璃比色皿/96 孔板中，检测550nm 处吸光值，计算ΔA测定=A测定-A空白，∆A标准=A标准-A空白。

四、羟脯氨酸含量计算：
1.标准曲线的绘制：以标准溶液的浓度为 x 轴，∆A标准(∆A标准=A标准-A空白)为 y 轴，绘制标准曲线，得到方程 y=kx+b。将∆A测定(∆A测定=A测定-A空白)带入方程得到 x(μg/mL)。
2.羟脯氨酸含量的计算：
(1)按样品重量计算
组织羟脯氨酸含量 (μg/g) = x×V样本÷(W×V样本÷V 组提)=4x÷W
(2)按样本蛋白浓度计算
组织羟脯氨酸含量 (µg/mg prot)= x×V样本÷(Cpr×V样本)=x÷Cpr
(3)按细菌或细胞密度计算
细胞羟脯氨酸含量 (μg/10⁴ cell) = x×V样本÷(细胞数量×V样本÷V 胞提)=2x÷细胞数量
注：V样本：加入的样本体积，0.05mL；V 组提：组织提取液体积，4mL；V 胞提：细胞提取液体积，2mL；W：样本质量，g；细胞数量：以10⁴为单位，万个；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL。

注意事项

1.试剂有一定的毒性，请操作时做好防护措施，防止吸入或与皮肤接触。
2.如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
3.按样本蛋白浓度计算时，需单独提取样本中的蛋白质并测定。
4.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。