DFR Assay Kit (Spectrophotometry)

二氢黄酮醇还原酶作用于二氢槲皮素产生儿茶素，可与香草醛缩合形成红色化合物，在500nm处有特征吸收峰。

50T/24S规格的产品组成及保存条件： 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计、恒温水浴锅、天平、研钵、1mL玻璃比色皿、乙醇和蒸馏水。

二、酶液提取：
1.组织：按照组织质量（g）：CB0212S-ES体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL CB0212S-ES），进行冰浴匀浆。10000g ，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2.液体：直接检测。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热30min，调节波长至500nm。
2.将 10 mg/mL 标准液用无水乙醇稀释为 0.25、0.2、0.15、0.1、0.05、0.25、0.01mg/mL 的标准溶液备用。
3.操作表（在1mL玻璃比色皿中加入如下试剂）：

四、酶活性计算公式
1.标准曲线的绘制：
根据标准管的浓度(x，mg/mL)和吸光度ΔA标准(y，ΔA标准)，建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA测 定(y，ΔA测定)带入公式计算样本浓度(x，mg/mL)。
1.酶活性的计算
(1)蛋白浓度计算
酶活定义：在30℃，pH7.5条件下，每毫克蛋白每分钟分解二氢槲皮素产生1mmol儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。
DFR活性(mmol/min/mg prot) = x×V反总÷(V样×Cpr)÷T÷2 =0.083x÷Cpr
(2)按样本质量计算
酶活定义：在30℃，pH7.5条件下，每克组织每分钟分解二氢槲皮素产生1mmol儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。
DFR活性(mmol/min/g 鲜重) = x×V反总÷(V样×W÷V样总)÷T÷2 = 0.083x÷W
注：V反总：反应总体积，1mL；V样：反应体系中样本体积，0.2mL；V样总：加入CB0212S-ES体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量，g；T：反应时间，30min。
2.按照蛋白浓度计算
酶活性定义：在30℃，pH7.5条件下，每毫克蛋白每分钟分解二氢槲皮素产生1mmol儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。
DFR活性(mmol/min/mg prot) = (△A-0.0002)÷0.0184×V反总÷(V样×Cpr)÷T÷2 = 9.06×(△A-0.0002)÷Cpr
3.按照样本质量计算
酶活性定义：在30℃，pH7.5条件下，每克组织每分钟分解二氢槲皮素产生1mmol儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。
DFR活性(mmol/min/g 鲜重) = (△A-0.0002)÷0.0184×V反总÷(V样×W÷V样总)÷T÷2 = 9.06×(△A-0.0002)÷W
3.按液体体积计算
酶活性定义：在30℃，pH7.5条件下，每毫升液体每分钟分解二氢槲皮素产生1mmol儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。
DFR活性(mmol/min/mL) = (△A-0.0002)÷0.0184×V反总÷V样÷T÷2 = 9.06×(△A-0.0002)
注：V反总：反应总体积，1mL；V样：反应体系中样本体积，0.1mL；V样总：加入CB0212S-ES体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量，g；T：反应时间，30min。

1.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。