Trypsase Assay Kit (Microanalysis)

胰蛋白酶催化水解 BAEE 的酯键，生成 BA，BA 在 253nm 处有吸收峰，通过测定 253nm 吸光度增加速率，即可计算出胰蛋白酶的活性。

100T/96S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板（UV 板）、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

二、粗酶液提取：
组织样品：按照组织质量（g）：CB0169M-A体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0169M-A）冰浴匀浆，8000g，4℃离心 10min，取上清，即粗酶液，置冰上待测。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热 30 min，调节波长到 253 nm，蒸馏水调零。
2.工作液的配制：将CB0169M-B、CB0169M-C按 2：97 配制工作液，按需配制，实验前置于37℃水浴预热 30min。
3.在微量石英比色皿/96 孔板（UV板）中依次加入下列试剂：

注意：空白管只需做1-2次。

四、胰蛋白酶活性计算公式：
a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1.按蛋白浓度计算
活性单位定义：在1ml体系下，37℃每毫克蛋白质每分钟催化 253nm 处吸光值增加0.001为 1 个酶活单位。
胰蛋白酶 (U/mg prot) = (ΔA测定-ΔA空白) ÷0.001÷(Cpr×V1)÷T×(V3÷V4) = 10⁵×(ΔA测定-ΔA空白) ÷Cpr

2.按样本质量计算
活性单位定义：在1ml体系下，37℃每克组织每分钟催化 253 nm 处吸光值增加 0.001 为 1 个酶活单位。
胰蛋白酶 (U/g) = (ΔA测定-ΔA空白) ×V反总÷(W×V1÷V2)÷T×(V3÷V4) =10⁵×(ΔA测定-ΔA空白)÷W
注： Cpr：粗酶液蛋白质浓度mg/mL，需要另外测定；W：组织质量(g)；V1：加入反应体系中粗酶液体积(mL)，2μL=0.002mL；V2：粗酶液总体积(mL)，1 mL；T：反应时间(min)，1min；V3：反应总体积，198µL+2µL=200µL=0.2mL；V4：1 mL体系。

b. 使用 96 孔板测定的计算公式如下
1.按蛋白浓度计算
活性单位定义：在1ml体系下，37℃每毫克蛋白质每分钟催化 253 nm 处吸光值增加0.0005为1 个酶活单位。
胰蛋白酶 (U/mg prot) = (ΔA测定-ΔA空白) ÷0.0005÷(Cpr×V1)÷T×(V3÷V4) =2×10⁵×(ΔA测定-ΔA空白)÷Cpr
2.按样本质量计算
活性单位定义：在1ml体系下，37℃每克组织每分钟催化 253 nm 处吸光值增加0.0005为1个酶活单位。
胰蛋白酶 (U/g) = (ΔA测定-ΔA空白) ÷0.0005÷(W×V1÷V2)÷T×(V3÷V4)=2×10⁵×(ΔA测定-ΔA空白)÷W
注： Cpr：粗酶液蛋白质浓度(mg/mL)，需要另外测定；W：组织质量(g)；V1：加入反应体系中粗酶液体积(mL)，2μL=0.002mL；V2：粗酶液总体积(mL)，1 mL；T：反应时间(min)，1min；V3：反应总体积，198µL+2µL=200µL=0.2mL；V4：1 mL 体系。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.预实验保证吸光值变化在 0.01～0.1 之间。
3.若所测结果 ΔA测定为负值，可适当将CB0169M-B稀释（2倍或4倍）再进行实验。
4.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。