Sucrose Phosphorylase Assay Kit (UV Spectrophotometry)

Name: Sucrose Phosphorylase Assay Kit (UV Spectrophotometry)
Brand: TargetMol
SKU: CB0202UV
Rating: 5 (4 reviews)

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产品编号 CB0202UV

别名 蔗糖磷酸化酶活性检测试剂盒（紫外分光光度法）

蔗糖磷酸化酶（SP）（EC2.4.1.7）主要存在于微生物和植物中，裂解葡萄糖苷键，催化葡萄糖基转移到果糖、木糖、半乳糖和鼠李糖等，合成相应的葡萄糖基低聚糖。此外，SP 还能催化氢醌合成熊果苷，具有极强的美白效果，在化妆品工业中具有重要应用。

规格	价格	库存	数量
50 T	¥ 4,622	10-12日内发货

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实验操作小课堂

常见问题解答

检测原理

SP 能够以磷酸为受体，催化蔗糖产生 1-磷酸葡萄糖，在葡萄糖磷酸变位酶催化下变位为 6- 磷酸葡萄糖，在 6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下还原 NADP⁺生成 NADPH，导致 340nm 光吸收值增加。测定 340nm 吸光度增加速率，即可计算 SP 活性。

产品规格

50T/48S规格的产品组成及保存条件：

编号	规格	储存条件
CB0202UV-ES	液体 60mL×1 瓶	4℃保存；
CB0202UV-A	液体 20mL×1 瓶	4℃保存；
CB0202UV-B	粉剂×1 瓶	4℃保存；临用前加 15mL 双蒸水溶解，4℃可保存一个月；
CB0202UV-C	液体 2mL×1 支	4℃保存；
CB0202UV-D	粉剂×2 瓶	-20℃保存，临用取 1 瓶加 1.5mL 双蒸水溶解，分装后-20℃可保存 2 周；
CB0202UV-E	粉剂× 1 瓶	-20℃避光保存，临用前加 10mL 双蒸水溶解，分装后-20℃可保存 4 周；
CB0202UV-F	粉剂× 3 支	-20℃避光保存，临用取 1 支加 1 mL 双蒸水溶解，分装后-20℃可保存 2 周；临用前按 CB0202UV-F：双蒸水=1:1 的比例稀释，现用现配；
CB0202UV-G	粉剂 ×4 支	-20℃避光保存，临用取 1 支加 0.7 mL 双蒸水解，分装后-20℃可保存 2 周；临用前按 CB0202UV-G：双蒸水=1:1 的比例稀释，现用现配。

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

操作说明

一、自备用品：
紫外分光光度计、天平、低温离心机、恒温水浴锅、研钵/匀浆器、1 mL 石英比色皿、冰和蒸馏水。

二、粗酶液提取：
1.组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃，离心 10min，取上清于冰上待测。
2.细菌或细胞：按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议
500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 200w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。
3.液体：直接检测；若液体浑浊可离心后取上清测定。

三、测定步骤：
1.紫外分光光度计预热 30min，调节波长至 340nm，蒸馏水调零；
2.CB0202UV-A 于 37℃预热 10min；
3.在1ml 石英比色皿/EP 管中按列表中顺序加入上述试剂：

试剂名称	对照管（µL）	测定管（µL）
CB0202UV-A	425	325
CB0202UV-B	250	250
CB0202UV-C	25	25
CB0202UV-D	50	50
CB0202UV-E	50	50
CB0202UV-F	100	100
CB0202UV-G	100	100
混匀，37℃水浴预热 5min
样本待测液		100
迅速混匀，于 1mL 石英比色皿，对照管调零，测定第 15s 时 340nm 的初始值 A1，测定完立即放入 37℃水浴准确反应 2min，再迅速测定 2min15s 时340 nm 吸光值 A2，ΔA= A2- A1

注意：对照管只需测定 1-2 次。

四、SP 活性计算公式：
1.按照蛋白浓度计算
酶活定义：37℃，pH6.8 时，每毫克蛋白质每分钟催化产生 1nmol NADPH 为一个酶活单位。
SP 活性 (U/mg prot) = ΔA÷ε÷d ×V反总×10⁹÷(V样÷Cpr)÷T = 803.85×ΔA÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活定义：37℃，pH6.8 时，每克样本每分钟催化产生 1nmol NADPH 为一个酶活单位。
SP 活性 (U/g) =ΔA÷ε÷d ×V反总×10⁹÷(V样÷V样总×W)÷T = 803.85×ΔA÷W
3.按照细胞数量计算
酶活定义：37℃，pH6.8 时，每10 ⁴个细胞每分钟催化产生 1nmol NADPH 为一个酶活单位。
SP 活性 (U/10⁴cell) = ΔA÷ε÷d ×V反总×10⁹÷[V样÷V样总×细胞数量(万个)]÷T = 803.85×ΔA÷细胞数量(万个)
注：ε：NADPH 摩尔消光系数，6220 L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应体系总体积， 0.001L；V样：反应体系中样本体积,，0.1mL；V样总：提取液体积，1mL；W：样本质量，g；Cpr：蛋白浓度，mg/mL；T：反应时间，2min；10⁹：1mol=10⁹nmol

注意事项

1.若吸光度过大或过小，可以通过增加或减少样本量进行调整。
2.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的 BCA Protein Quantification Kit (C0050)。。
3.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。