Plant Lipoxidase Assay Kit (Microanalysis)

LOX 催化亚油酸氧化，氧化产物在 234nm 处有特征吸收峰；测定 234nm 吸光度增加速率，来计算 LOX 活性。

100T/96S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、酶标仪、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、可调式移液枪和蒸馏水。

二、粗酶提取：
按照组织质量（g）：CB0172M-A体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0172M-A）进行冰浴匀浆。16000g，4℃离心 20min，取上清置冰上待测。

三、测定步骤：
1.分光光度计/酶标仪预热 30 min，调节波长到 234 nm，蒸馏水调零。
2.CB0172M-B在 25℃水浴中预热 30 min。
3.在 微量石英比色皿/96孔板中依次加入下列试剂：

四、LOX活性计算公式：

a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1.按照蛋白浓度计算
活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化 0.001 个单位为 1 个酶活单位。
LOX活性 (U/mg prot) = [(A4-A3)-(A2-A1)]×V反总÷(Cpr×V样)÷T÷0.001 = 10000×[(A4-A3)-(A2-A1)]÷Cpr
2.按照样本质量计算
活性单位定义：25℃中每克组织每分钟催化吸光值变化 0.001 个单位为 1 个酶活单位。
LOX活性 (U/g) = [(A4-A3)-(A2-A1)]×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T÷0.001 = 10000×[(A4-A3)-(A2-A1)]÷W
注： Cpr：上清液蛋白浓度，mg/mL，需另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒；V反总：反应体系总体积，200μL=0.2mL；V样：加入反应体系中上清液体积，20μL=0.02mL；W ：样品质量，g；V样总：上清液总体积，1mL；T：反应时间,1min。

b. 使用 96 孔板测定的计算公式如下
1.按照蛋白浓度计算
活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化 0.0005 个单位为 1 个酶活单位。
LOX活性 (U/mg prot) = [(A4-A3)-(A2-A1)]×V反总÷(Cpr×V样)÷T÷0.0005= 20000×[(A4-A3)-(A2-A1)]÷Cpr
2.按照样本质量计算
活性单位定义：25℃中每克组织每分钟催化吸光值变化 0.0005 个单位为 1 个酶活单位。
LOX活性 (U/g) = [(A4-A3)-(A2-A1)]×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T÷0.0005= 20000×[(A4-A3)-(A2-A1)]÷W
注： Cpr：上清液蛋白浓度，mg/mL，需另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒；V反总：反应体系总体积，200μL=0.2mL；V样：加入反应体系中上清液体积，20μL = 0.02mL；W ：样品质量，g；V样总：上清液总体积，1mL；T：反应时间,1min。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.CB0172M-C易自发氧化，从而导致空白管测定值偏高，必须临用前配制，并且当天使用完毕。
3.样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日完成酶活性测定。
4.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。