NPSH Assay Kit (Spectrophotometry)

巯基基团与5,5'-二硫代-双-硝基苯甲酸（DTNB）反应，生成黄色化合物，在412nm处有最大吸收峰。

50T/24S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计、恒温水浴锅、天平、研钵、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、超声破碎仪、无水乙醇、冰和蒸馏水。

二、样品制备：
1.按照组织质量（g）：CB0211S-ES体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL CB0211S-ES）进行冰浴匀浆，然后8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2.细胞或细菌：按照细胞数量（10⁴个）：CB0211S-ES体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500万细胞加入1mL CB0211S-ES），超声波破碎细胞（功率 200w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min），然后 8000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。
3.血清、培养液：取0.1mL样本，加入1mL CB0211S-ES，混匀，室温静置10min, 然后8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热30min，调节波长至412nm，双蒸水调零。
2.标准品的制备：将50μmol/mL标准溶液用提取液稀释至1、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1μmol/mL的标准液待测，现用现配。
3.操作表（在1mL玻璃比色皿中加入如下试剂）：

四、计算公式：
1.标准曲线的绘制：根据标准管的浓度(x，μmol/mL)和吸光度ΔA标准(y，ΔA标准)，建立标准曲线；再根据标准曲线，将ΔA测定(y，ΔA测定)带入公式计算样本浓度(x，μmol/mL)。
2.非蛋白质巯基含量计算：
(1)按样本质量计算
非蛋白质巯基含量(μmol/g 质量)=x×V提取÷W=x÷W
(2)按血清、培养液体积计算
非蛋白质巯基含量(μmol/mL)=x×(V提取+V液体)÷V液体=11×x
(3)按细胞数量计算
非蛋白质巯基含量(μmol/10⁴ cell)=x×V提取÷500=0.002×x
注：V提取：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g；Cpr，样本蛋白浓度，mg/mL；500：500万个细胞；
V 液体：血清（浆）或培养液体积，0.1mL。

1.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。