LOX Assay Kit (Microanalysis)

LOX 催化亚油酸氧化，氧化产物在280nm 处有特征吸收峰；测定280nm 吸光度增加速率，来计算LOX 活性。

100T/48S规格的产品组成及保存条件： 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板（UV 板）、研钵、冰、台式离心机、可调式移液枪和蒸馏水。

二、粗酶液提取：
按照组织质量（g）：CB0284M-A体积（mL）为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL CB0284M-A）进行冰浴匀浆。16000g，4℃离心20min，取上清置冰上待测。

三、测定步骤：
1.分光光度计/酶标仪预热30 min，调节波长到280nm，蒸馏水调零。
2.在CB0284M-C中加入10mL CB0284M-B（振荡混匀1min），在30℃水浴中预热10 min 以上。用不完的试剂4℃保存。
3.样本测定（在微量石英比色皿/96 孔板中加入）:

四、LOX活性计算：
1.按照蛋白浓度计算：
活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化0.01 个单位为1 个酶活单位。
LOX (U/mg prot) = ΔA×V反总÷(Cpr×V样)÷T×100 = 33.33×ΔA÷Cpr
2.按照样本质量计算：
活性单位定义：25℃中每克组织每分钟催化吸光值变化0.01 个单位为1 个酶活单位。
LOX (U/g 鲜重) = ΔA×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T×100 = 33.33×ΔA÷W
注：Cpr：上清液蛋白浓度，mg/mL，需另外测定，建议使用本公司BCA 蛋白质含量测定试剂盒；V反总：反应体系总体积，200μL=0.2mL；V样：加入反应体系中上清液体积，20μL=0.02mL；W ：样品质量，g；V样总：上清液总体积，1mL；T：反应时间，30min。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.样本处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日完成酶活性测定。
3.正式实验前做 1~2 个预实验，保证∆A 的值在 0.02~1.0范围内；若反应后为明显的悬浊液，则需稀释后再测。
4.若样本颜色较深，可用3-5mg活性炭充分震荡5min左右再离心取上清待测。
5.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
6.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。