Lipase Assay Kit (Spectrophotometry)

LPS 催化油酯水解成脂肪酸，利用铜皂法测定脂肪酸生成速率，即可计算 LPS 活性。

50T/48S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
研钵、台式离心机、震荡混匀器、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、甲苯、无水乙醇、冰和蒸馏水。

二、粗酶提取：
1.血清等液体：可以直接检测。
2.组织：称取100mg 组织，加入 1mL CB0092S-A进行冰浴匀浆，15000rpm，4℃离心30min，取上清置冰上待测。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热 30min，调节波长到 710 nm，甲苯调零。
2.CB0092S-A和CB0092S-B置于 37℃水浴预热 30min。
3.标准溶液的稀释：将125 µmol/mL的油酸标准溶液用无水乙醇稀释为125、62.5、31.25、15.625、7.8125、3.9 µmol/mL的标准溶液待测。
4.操作表：

四、LPS 活性计算公式：
1.标准曲线的绘制：以油酸标准溶液浓度为横坐标，ΔA标准为纵坐标，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b。 将ΔA测定带入方程，得到x(µmol/mL)。
2.LPS 活性计算：
(1)按照蛋白浓度计算
活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位。
LPS (U/mg prot) =x×V样÷(Cpr×V样))÷T= 0.1×x÷Cpr

(2)按照样本质量计算
活性单位定义：37℃中每克组织每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位。
LPS (U/g质量) =x×V样÷(W×V样÷V提)÷T= 0.1×x÷W
(3)按血清计算
活性单位定义：37℃中每毫升血清每分钟水解橄榄油生成 1 μmol 脂肪酸为一个酶活单位。
LPS (U/mL血清) =x÷T= 0.1×x
注：V样：加入反应体系中上清液体积，0.2mL；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL，需要另外测定；T：催化反应时间，10min；W：样本质量，g；V提：提取液体积，1mL。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.实验过程中须远离火源。
3.当吸光度大于1时，建议将样本稀释后测量。
4.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
5.甲苯有一定毒性，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。