固定细胞染色
一、样品准备：
1.用于悬浮培养或血液学样品中的细胞：用冰冷的PBS冲洗一次细胞，并以10^6个细胞/mL的冰质量悬浮在冰冷的PBS中。
2.对于附着在组织培养板上的细胞：通过胰蛋白酶化来从烧瓶或培养皿中收集细胞，将胰蛋白酶化的细胞与漂浮在培养基中的细胞（主要是分离的有丝分裂和死细胞）中的细胞填充，然后用培养基含有培养基，含有血清以灭活胰蛋白酶。最后将细胞悬浮在约10^6个细胞/mL的冰冷PBS中。
3.对于从实体瘤分离的细胞：冲洗细胞不含用于细胞解离的任何酶，并悬浮在约10^6个细胞/mL的冰冷PBS中。
二、操作步骤：
1.带有巴斯德移液器转移1 mL细胞悬浮液到含有10 mL冰冷70％乙醇的15 mL圆锥形玻璃管。将细胞固定在冰上≥2小时。
2.离心管在300×g，4°C下5分钟。用冰冷的PBS去除所有乙醇，冲洗一次，并以<2×10^6细胞/ml的密度悬浮在冰冷的PBS中。
3.提取0.2 mL细胞悬浮液（≤2×10^5个细胞），然后转移到小管中。在冰上冷却。
4.加入0.4 mL冰冷的透化溶液。等待15秒，将细胞保持在冰上。
5.加入1.2 mL冰冷的AO染色溶液。将细胞保持在冰上。
6.加入 1.2 mL 冰冷的Acridine Orange base 染色溶液。将细胞放在冰上。
7.加入Acridine Orange base 溶液后，在2 至 10 分钟内用流式细胞仪测量并记录细胞荧光。[1]