蛋白标记
一、溶液配制：
1.母液配置：配置成 10 mM的Cy7.5母液，分装后于 -20℃ 或 -80℃ 避光保存。
2.工作液配置：根据实验需求选择合适的工作液浓度，尽量现配现用，可以使用缩合液 （500 μg/mL） EDC hydrochloride 活化后方可进行后续标记实验。
3.染料工作液用量计算：标记反应所需的 CY7.5 染料用量取决于要标记蛋白的用量，CY7.5 染料与蛋白的最佳摩尔比为 10 左右；
例：假如所需标记蛋白为 500 μL 2 mg/mL 的 IgG （MW=150，000），用 100 μL DMSO 溶解一管 1 mg CY 染料，则所需 CY 体积为 3.95 μL。
二、蛋白样本准备：蛋白质推荐浓度范围为 2-10 mg/mL。
三、标记反应

1. 取算好体积的新鲜配制的 10 mg/mL CY7.5 染料缓慢加入到 0.5 mL 蛋白样品溶液中，轻轻摇匀混合，然后短暂离心将样品收集在反应管底部。切忌剧烈混匀，防止蛋白样品变性失活；
2. 将该反应小管置于避光处，在室温条件下轻轻摇晃孵育 60 分钟，每隔 10–15 分钟，将反应小管轻轻颠倒几次，以充分混合两种反应物，提高标记效率。